An��lise da variabilidade intra-esp��cie dos genes pld e rpoB de Corynebacterium pseudotuberculosis por meio de marcadores PCR-RFLP.

Corynebacterium pseudotuberculosis �� o agente etiol��gico da linfadenite caseosa em ovinos e caprinos, uma doen��a infectocontagiosa cr��nica caracterizada por abscessos em linfonodos superficiais ou internos. Os animais acometidos podem apresentar les��es internas ou externas, o que representa perdas econ��micas graves na caprinovinocultura, como o comprometimento da produ����o de l�� em ovinos, defici��ncia reprodutiva, condena����o da carne ou morte do animal. Uma vez estabelecida a infec����o no rebanho, torna-se dif��cil sua erradica����o. Com o objetivo de avaliar a variabilidade gen��tica intra-esp��cie em C. pseudotuberculosis, 31 isolados provenientes de seis munic��pios do Estado de Pernambuco, sendo 23 de caprinos e oito de ovinos, tiveram os seus DNAs gen��micos extra��dos e analisados por reação em cadeia da polimerase e an��lise de polimorfismos por tamanho de fragmentos de restri����o (PCR-RFLP). Os locis escolhidos foram os genes pld e rpoB, cujas seq����ncias dos oligonucleot��deos amplificaram fragmentos de 924 e 447 pares de bases (pb), respectivamente. Os produtos da amplifica����o foram digeridos com as enzimas Pst I e Msp I (gene pld) e HpyCh4 IV e Msp I (gene rpoB). Os fragmentos de restri����o foram corridos em gel de poliacrilamida a 15%, os quais foram corados com brometo de et��deo. Para o gene pld, digerido com a enzima Pst I, foram obtidos fragmentos de 566, 195, 91 e 72 pb; e com a enzima Msp I, fragmentos de 395, 369, 108 e 52 pb. O gene rpoB digerido com a enzima HpyCh4 IV apresentou fragmentos de 235, 126 e 86 pb; e com a enzima Msp I apresentou fragmentos de 222, 93, 78 e 54 pb. O padr��o de bandas obtido para os 31 isolados de C. pseudotuberculosis, analisados neste estudo, foi monom��rfico, n��o havendo, portanto, polimorfismo entre os diferentes isolados, independentes da esp��cie hospedeira ou da ��rea geogr��fica estudada, o que corrobora com o padr��o homog��neo da infec����o para a regi��o.

ELISA com MSP5 recombinante truncada para detec����o de anticorpos contra Anaplasma marginale em bovinos.

Os objetivos buscados pelos autores neste estudo foram produzir e solubilizar a prote��na MSP5 recombinante truncada de Anaplasma marginale e avaliar seu desempenho em um ensaio de imunoadsor����o enzim��tica indireto para detec����o de anticorpos contra a riqu��tsia. O gene msp5, exceto a regi��o N-terminal hidrof��bica, foi amplificado por reação em cadeia da polimerase, clonado em plasm��deo pTrcHis-TOPO e expresso em Escherichia coli. A solubiliza����o da prote��na recombinante foi avaliada em diferentes pHs e concentra����es de ur��ia. A sensibilidade e a especificidade do ensaio foram avaliados testando-se 66 soros de animais infectados experimentalmente com A. marginale e 96 soros negativos, com o estado de infec����o desses animais confirmado por reação em cadeia da polimerase. Um total de 1.666 amostras de soros bovinos, provenientes do Brasil - Rio Grande do Sul (73), Mato Grosso do Sul (91), Pernambuco (86), Bahia (314) e Minas Gerais (267), assim como do Uruguai (32) e Costa Rica (803) foram testadas nos ELISAs com MSP5 truncada e com MSP1a recombinantes, e a concord��ncia entre os dois testes foi avaliada. O ELISA indireto com MSP5 truncada foi capaz de detectar animais infectados com 96,97% de sensibilidade e 100% de especificidade. Nos animais infectados experimentalmente, o ELISA detectou anticorpos do 12o dia ap��s a inocula����o (DPI) at�� o ��ltimo dia de observa����o (37o DPI). Os ELISAs para MSP5 e MSP1a apresentaram concord��ncia de 95,67%, com ��ndice kappa de 0,81. Os resultados discordantes apresentaram uma diferen��a significativa (P < 0,001). Anticorpos contra A. marginale foram detectados em animais de todas asregi��es estudadas. O ELISA com MSP5 recombinante truncada apresentou bom desempenho na detec����o de anticorpos contra A. marginale, com alta sensibilidade e especificidade, representando uma importante ferramenta para o diagn��stico da anaplasmose bovina em estudos epidemiol��gicos.

Compara����o de m��todos de extra����o do DNA e avalia����o de rea����es da polimerase em cadeia (PCR) para o diagn��stico de Trypanosoma (Dutonella) vivax.

A introdu����o de Trypanosoma vivax na Am��rica Latina ocorreu por meio de gado zebu importado do Senegal para Guiana Francesa e Antilhas, e no Brasil, o primeiro registro desse hemoprotozo��rio foi feito no Estado do Par�� (SHAW; LAISON, 1972). At�� recentemente, a distribui����o de T. vivax estava restrita �� regi��o Norte do pa��s. Entretanto, em 1995, Silva et al. (1995) diagnosticaram esse hemoparasito em um rebanho bovino do Pantanal do Estado de Mato Grosso, munic��pio de Pocon��. Posteriormente, a tripanossom��ase por essa esp��cie de Trypanosoma foi diagnosticada em Mato Grosso do Sul, no Pantanal do munic��pio de Miranda e da Nhecol��ndia (PAIVA et al., 2000; D��VILA et al., 2003). Neste trabalho, foram avaliadas PCRs anteriormente descritas por Masake et al. (1997) e Geysen et al. (2003) e uma outra que utiliza primers, que tem seq����ncias complementares ao gene que codifica a prote��na de transporte da glicose, desenvolvida no Laborat��rio de Biologia Molecular da Embrapa Gado de Corte. O objetivo foi identificar a PCR de maior sensibilidade com rela����o ao exame parasitol��gico e analisar a efici��ncia da extra����o de DNA da camada de leuc��citos adsorvidos em papel com a metodologia usual que est�� baseada no fenol/clorof��rmio.

Melhoria dos canais de comunica����o da cadeia de suprimentos no setor de patrim��nio e materiais (SPM) da Embrapa Florestas.

2010

Avalia����o da reação de resist��ncia �� ferrugem da folha e do colmo �� campo no germoplasma de azev��m da Embrapa, safra 2006.

2007

Otimiza����o de protocolo para an��lise de AFLP em Lolium multiflorum Lam.

ESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA AN��LISE MOLECULAR DE AZEV��M ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracteriza����o de recursos gen��ticos, como a detec����o de grande n��mero de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e consider��vel reprodutibilidade, al��m de n��o necessitar de dados de seq��enciamento pr��vio da esp��cie para a constru����o de primers. Embora a an��lise de AFLP seja freq��entemente utilizada em estudos de variabilidade gen��tica em diferentes esp��cies, o uso da t��cnica em Lolium multiflorum ainda �� incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da t��cnica de AFLP em azev��m anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentra����es iniciais de DNA gen��mico de 100 e 250 ng, a digest��o do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digest��o: 3, 6 e 12 horas. Tamb��m foram avaliadas quatro concentra����es da solu����o resultante da liga����o dos adaptadores: solu����o sem dilui����o; dilu��da 1:5; 1:10 e 1:20 e duas dilui����es ap��s a reação de pr��-amplifica����o, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior n��mero e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentra����o inicial de DNA gen��mico de 100 ng, num volume final de reação de digest��o 10 ?l, com 1U de cada enzima EcoRI e MseI e tempo de reação de 12h a 37��C, com reação de liga����o de adaptadores realizada com a adi����o da solu����o de liga����o de adaptadores, do Kit AFLP? Analysis System I (InvitroGen Life Technologies, Carlsbad, Calif., USA), e 0,4 U de T4 DNA ligase em um volume final de 10?l, por 2h a 20��C. Ap��s a liga����o de adaptadores a dilui����o dever�� ser de 1:5. A reação de pr��-amplifica����o dever�� ocorrer a partir de 1?l desta ��ltima solu����o (dilu��da 1:5), 1,0 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 7.6) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA 0,003% e 1 U de Taq DNA polimerase, completando com mix de pr��-amplifica����o do Kit AFLP? Analysis System I at�� alcan��ar o volume final de 11?l. O produto da pr��-amplifica����o dever�� ser dilu��do 1:25 antes de ser procedida �� amplifica����o seletiva, a qual deve ser realizada utilizando 2,5 ?l da solu����o de DNA pr��-amplificado (dilu��do 1:25), 1 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 8,4) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA (0,003%), 1 U de Taq DNA polimerase, 10 ng de primer EcoRI, 1,5 ng de primer MseI, 0,4mM de DNTps e H2O MilliQ? at�� completar o volume final de 10?l. Com este protocolo uma ��nica combina����o de primers permitiu identificar 58 bandas polim��rficas na an��lise de duas popula����es de azev��m anual.

Evolu����o e cadeia produtiva da agricultura org��nica.

2006

Avalia����o preliminar de popula����es de cenoura para reação �� mistura populacional de Meloidogyne incognita ra��a 1 e Meloidogyne javanica.

2009

Restri����es �� melhoria da competitividade da cadeia agroindustrial de f��cula de mandioca.

Metodologia; Fatores restritivos �� competitividade: Fatores associados �� demanda; Subs��dios no mercado externo; Assimetria de informa����o quanto �� aplicabilidade; Instabilidade na qualidade e cianog��nese; Fatores tecnol��gicos; Tecnologia de produ����o agr��cola; Tecnologia de processamento; Fatores estruturais e sist��micos; Instabilidade no pre��o e escala; Rela����o produtor-ind��stria: situa����o atual e limitantes; A interdepend��ncia entre os mercados de f��cula e de farinha; Estrutura de mercado e concorr��ncia; Pol��ticas p��blicas de apoio; Caracter��sticas dos sistemas de produ����o; Encargos fiscais; Organiza����es setoriais; Estrutura agr��ria e disponibilidade de m��o de obra familiar; Competitividade dos amidos, segundo as fontes de mat��ria prima; Outros fatores.

Reação de cultivares com rela����o �� produ����o de gr��os ardidos em milho.

2007

Reação de cultivares de milho a mancha foliar causada por Stenocarpella macrospora.

2006

Dimens��es econ��micas e organizacionais da cadeia produtiva da carne su��na.

2006

Catalogo de teses; Centro Nacional de Pesquisa de Soja.

Difusao de tecnologia; Ecologia; Economia; Entomologia; Estatistica; Fisiologia; Fitopatologia; Fixacao de nitrogenio; Industrializacao e usos; Informatica; Mecanizacao agricola; Melhoramento; Nematologia; Plantas daninhas; Praticas culturais; Sementes; Solos.

Avalia����o de reação a o��dio (Blumeria graminis f. sp. tritici) em linhagens de trigo oriundas do Paran��, em 2009.

2009

Reação �� brusone de gen��tipos de trigo do programa de melhoramento da Embrapa Trigo no est��dio de planta adulta.

2008